今天，上海恒遠生物科技有限公司要與大家分享ELISA試劑盒技術的一些相關知識，希望能夠幫助到大家。

一、實驗原理：

結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體與受檢標本（抗原或抗體）起反應。用洗滌的方法洗去未結(jié)合的抗原或抗體。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關，根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。根據(jù)實際的應用方法，可以分成以下幾種：

• 雙抗夾心 ELISA：將捕獲抗體包被在固相載體上，封閉后加入待檢抗原，溫育后加入酶標檢測抗體，捕獲抗體和檢測抗體可以是針對不同表位的兩種單抗，也可以是針對同一抗原的一種單抗與一種多抗，但是檢測抗體需要經(jīng)過酶標。

• 競爭ELISA：用待檢抗原或抗體去干擾已經(jīng)預先設計好的體系，zui終顯色的結(jié)果與待檢抗原或抗體的干擾程度成負相關。主要應用于只有一個抗原表位的蛋白檢測。

• 多因子ELISA檢測技術：多重ELISA芯片技術通過在96孔板的每個孔中以陣列的形式植入1~25種捕獲抗體，隨后像ELISA一樣操作，通過化學發(fā)光(HRP酶)和熒光燃料(紅外)來檢測。

受刺激的細胞產(chǎn)生的細胞因子是短暫的，并且不同細胞因子基因表達的動力學是變化的。通過ELISA實驗只能檢測到的免疫反應性的細胞因子蛋白的含量，而這并不能*代表細胞因子的生物活性的水平。例如，使用抗細胞因子抗體的一種ELISA不能區(qū)別如TGF-β1的細胞因子蛋白是無活性的前體形式還是有活性的成熟蛋白。此外，一種ELISA可以檢測部分降解的細胞因子蛋白，它們?nèi)杂忻庖叻磻裕ɡ缰辽倏勺R別兩個表位），當時它可能卻喪失了它們的生物學活性。

二、實驗過程：

包被酶標版>封閉 >加樣品孵育>洗滌 >加抗體孵育>洗滌 >加入酶底物>終止反應 >讀數(shù)

三、ELISA操作要點：

1. 選擇合適的固相載體；

2. 選擇合適的包被緩沖液；

3. 確定*包被量；

4. 加樣準確，避免產(chǎn)生氣泡。

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